通用菌落PCR檢測試劑盒

Cat. #：P8011，P8012

產品簡介

本試劑盒利用PCR原理，結合本公司的快速DNA聚合酶（延伸速率20s/kb），設計適用性廣的最佳引物，優化PCR反應緩沖體系，同時簡化檢測方法，可用于各種常用T載體克隆的篩選檢測。

產品組成

活性定義

一個活性單位（U）指用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在72℃、30 min內，攝入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

保存條件

-20℃保存。

質量控制

純度檢測：經質量檢測，產品不含脫氧核糖核酸內切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能檢測：PCR方法檢測本試劑盒無宿主殘余DNA，也無其他DNA污染，能有效完成PCR擴增。

應用舉例

1. 準備樣品

將過夜培養的平板上的菌落編號后，用滅菌的牙簽挑取單克隆菌體的一部分至反應體系中；或在1.5 ml EP管中分裝500 μl含有相應抗生素的LB培養基，并做好標記，用無菌牙簽提取單個菌落至上述培養基中，37振蕩（250-300rpm）培養4h，取1-2 μl菌液用于擴增。

2. 配制反應體系

請于冰上配置反應體系，體系大小與組分用量與添加順序可調整：

*包含了上下游引物，擴增大小約為：克隆片段+250 bp。

● 加入各組分后，請用槍頭反復吸吹幾次，充分混勻。

● 在一次配制多管需分裝時建議按（n+1）的反應液量配制，以確保分配時的耗損不會影響實驗，同時選擇大于總體積的離心管便于混勻。

● 如需使用其他體積的PCR反應體系，請按各組分比例縮減或增加各組分用量。

● 將混勻的各管短暫離心，置于PCR儀中。

3. 設定反應程序進行PCR反應

● 設定PCR程序時，請根據目的片段大小決定延伸時間，如果目的片段大小為500 bp時，延伸時間為15 sec；500 bp-1 kb，延伸時間20 sec；目的片段>1 kb時，延伸時間按20s/kb計算。

3. 分析結果

反應結束后取2-5 μl反應產物與loading buffer混勻后進行瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠成像設備觀察目的條帶的擴增情況。

注意事項

請嚴格按照說明書提供的實驗體系及實驗條件進行試驗。

室溫下DNA聚合酶有一定的活性，為避免發生非特異性擴增，請于冰上配置反應體系，并且最后添加FS^TM Mix或模板DNA。

挑取菌落時，應選擇單菌落，不要挑取太多菌體，以免影響PCR結果。

部分適用T載體參考下表：