PCR教學(xué)試劑盒

Cat. #：P8021，P8022

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

本試劑盒是按照教學(xué)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容設(shè)計(jì)的，符合標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增流程的，教學(xué)用PCR反應(yīng)試劑盒。本試劑盒所提供的模板為插入特定大小DNA片段的PBluescipt SK（+）重組質(zhì)粒；引物為根據(jù)所插入DNA序列和擴(kuò)增片段大小不同設(shè)計(jì)的上下游引物。PCR結(jié)果可獲得特定大小（500 bp或1,000 bp）的PCR產(chǎn)物。

產(chǎn)品組成

活性定義

一個(gè)活性單位（U）指用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在72℃、30 min內(nèi)，攝入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

保存條件

10×PCR緩沖液保存于4℃，其他成分-20℃保存。

質(zhì)量控制

純度檢測(cè)：經(jīng)質(zhì)量檢測(cè)，產(chǎn)品不含脫氧核糖核酸內(nèi)切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能檢測(cè)：PCR方法檢測(cè)本試劑盒無(wú)宿主殘余DNA，也無(wú)其他DNA污染，能有效完成PCR擴(kuò)增。

應(yīng)用舉例

1. 配制反應(yīng)體系

請(qǐng)于冰上配置反應(yīng)體系，體系大小與組分用量與添加順序可調(diào)整：

● 加入各組分后，請(qǐng)用槍頭反復(fù)吸吹幾次，充分混勻。

● 在一次配制多管需分裝時(shí)建議按（n+1）的反應(yīng)液量配制，以確保分配時(shí)的耗損不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)，同時(shí)選擇大于總體積的離心管便于混勻。

● 如需使用其他體積的PCR反應(yīng)體系，請(qǐng)按各組分比例縮減或增加各組分用量。

● 組分中引物、DNA模板、Taq DNA聚合酶常用于梯度實(shí)驗(yàn)，如有調(diào)整，請(qǐng)注意調(diào)超純水的用量至相應(yīng)的體系。

● 將混勻的各管短暫離心，置于PCR儀中。

2. 設(shè)定反應(yīng)程序進(jìn)行PCR反應(yīng)

● 設(shè)定PCR程序時(shí)，請(qǐng)根據(jù)目的片段大小決定延伸時(shí)間，如果目的片段大小為500 bp時(shí)，延伸時(shí)間為30 sec，目的片段為1 kb時(shí)，延伸時(shí)間為45 sec。

3. 分析結(jié)果

反應(yīng)結(jié)束后取2-5 μl反應(yīng)產(chǎn)物與loading buffer混勻后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，通過(guò)凝膠成像設(shè)備觀察目的條帶的擴(kuò)增情況。

● 500 bp產(chǎn)物建議電泳條件為1.7%瓊脂糖凝膠，0.5×TBE，7 V/cm，20-40 min，建議Marker為 DSTM 2000（M1101）。

● 1 kb產(chǎn)物建議電泳條件為1.0%瓊脂糖凝膠，1×TAE，7 V/cm，20-40 min，建議Marker為 DSTM 5000（M1111）。

注意事項(xiàng)

請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書提供的實(shí)驗(yàn)體系及實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行試驗(yàn)。

室溫下Taq DNA聚合酶有一定的活性，為避免發(fā)生非特異性擴(kuò)增，請(qǐng)于冰上配置反應(yīng)體系，并且最后添加Taq DNA聚合酶或模板DNA。

挑取菌落時(shí)，應(yīng)選擇單菌落，不要挑取太多菌體，以免影響PCR結(jié)果。