FS? Mix Direct for Blood

Cat. #：P2071a，P2072a

產品簡介

FS? Mix Direct for Blood是適合全血模板擴增的2×濃縮快速高效PCR預混合溶液，含有FS? Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、緩沖液等PCR擴增必需組分（模板與引物除外）。使用時，僅需在擴增體系中加入模板和引物即可進行PCR，從而可以極大地簡化操作過程，縮短操作時間，降低污染（加樣次數減少）。FS? Mix Direct for Blood的反應體系經過優化處理，高靈敏度的FS? Taq DNA聚合酶確保處理液中的微量樣本得到高效擴增。本產品不用進行繁瑣的DNA提取，最大限度減少實驗誤差和交叉污染；同時依靠特殊的緩沖體系增強PCR擴增的特異性，保證擴增效果與DNA模板擴增效果同樣可靠。

FS? Taq DNA聚合酶是根據蛋白工程原理，以Taq DNA聚合酶為基礎，研發設計的新一代DNA聚合酶。本產品具有類似KOD酶的快速擴增能力，延伸速度為20s/kb（70~75℃，簡單模板可達5s/kb）。是普通Taq DNA聚合酶的3倍，可縮短一半以上的擴增時間；同時具備Taq DNA聚合酶擴增效率高、適應性廣等優點。FS? Taq DNA聚合酶使用方法與普通Taq DNA聚合酶基本相同，只需注意適當縮短延伸時間。該酶具有5'→3'聚合酶活性，無3'→5'外切酶活性。擴增產物具有3'-dA突出端，可直接用于TA克隆。

產品組成

本產品分體系中包含溴酚藍、不含溴酚藍兩類。體系中包含溴酚藍的產品，PCR擴增產物可直接電泳檢測。這兩類產品的擴增性能無差異。如無特別說明提供體系中包含溴酚藍的包裝。

保存條件

-20℃保存2年。

質量控制

純度檢測：經質量檢測，產品不含脫氧核糖核酸內切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能檢測：PCR方法檢測無宿主殘余DNA，能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。

應用舉例

1. 配制反應體系

請于冰上配置反應體系，體系大小與組分用量與添加順序可調整：

[1] 引物終濃度建議范圍：0.1-1 μM。特異性差時可降低濃度，效率低時可提高濃度。

[2] 可單獨訂購超純水（Cat. #：P9021/P9022/P9023）。

[3] 可單獨訂購25mM MgCl₂（Cat. #：P9031）和PCR Enhancer（Cat. #：P9041）。

2. 設定反應程序進行PCR反應

大多數模板的快速擴增條件：

[1] 退火溫度應根據Tm值較低的引物來設。

[2] 延伸時間按20 sec/kb來設最佳。

1kb簡單模板的快速擴增條件：

由于1kb簡單模板的二級結構簡單，且長度較短，可同時縮短變性、退火時間至15s，以實現快速擴增。

3. 分析結果

反應產物可直接進行瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠成像設備觀察目的條帶的擴增情況。如有需要，可進行割膠回收。無產物或產物量少的改進措施有：1調整退火溫度；2減少抑制劑的影響，如提取的基因組DNA中含有抑制擴增的成分，需要高倍稀釋（1: 10000）后使用；3采用乙醇沉降洗脫，提高模板DNA的純度；4使用PCR添加劑，如PCR Enhancer（Cat. #：P9041）、MgCl₂（Cat. #：P9031）等可提高產量。

操作注意事項

室溫下FS? Taq DNA聚合酶有一定的活性，為避免發生非特異性擴增，請于冰上配置反應體系，并且最后添加模板DNA。

本產品可直接從新鮮或凍存的全血、抗凝全血（EDTA或其他抗凝劑）、FTA卡等樣本擴增DNA。可用于人血或其他動物血液。

延伸時間視片段長度而定。一般情況，≤500bp目的片段延伸15s，500bp-1kb延伸20s，＞1kb延伸時間按20s/kb計算。

FS? Taq DNA聚合酶具有脫氧核苷酸轉移酶活性，因此在PCR產物3’末端通常會加上一個多余的脫氧腺嘌呤核苷，可進行TA克隆。

FS? Mix Direct for Blood也可采用常規程序擴增，擴增產物純化后可直接用于測序反應。

為方便加樣，全血可用PBS稀釋后加樣，模板用量根據樣本、實驗要求而定。

引物設計注意事項

引物長度一般在15-30個堿基之間；上下游引物3’末端避免互補，避免出現3個以上重復的G或C，或出現發夾結構，否則會產生非特異性擴增；GC含量控制在40-60%，且上下游引物GC含量盡量接近；Tm值控制在55-65℃之間，且上下游引物Tm值盡量接近，額外附加序列（酶切位點、修飾等）是非模板匹配序列，不參與Tm值計算。

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問：使用FSTM Mix Direct for blood擴增時是否需要使用快速PCR擴增儀？

答：不需要，使用普通的PCR擴增儀即可。

問：FSTM MixDirect for blood 的使用與普通Taq Mix 有何不同？

答：使用方法與普通Taq Mix 基本相同，只需注意擴增條件中時間適當縮短。

問：FSTM Mix Direct for blood擴增產物是否可用于TA克??？

答：FSTM Taq DNA 聚合酶 沒有3-5外切酶活性，所以PCR產物末端帶 A，可進行TA克隆。

問：FSTM 系列與KOD系列產品相比有什么區別？

答：KOD有3-5外切酶活性，保真性比較高，但正因為有外切酶活性，容易降解引物及模板，所以其靈敏度及易用性方面不如FSTM Taq。普通檢測及基因診斷很少用到KOD

酶。