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FS Mix Direct for Blood(P2071a-P2072a)

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FS Mix Direct for Blood(P2071a-P2072a)

價格: 260.00~1140.00
運費 ¥0.00
P2071a(1 ml(40次,50 μl體系/次)) P2072a(1 mlx5(200次,50 μl體系/次)

FS? Mix Direct for Blood

Cat. #P2071aP2072a

產(chǎn)品簡介

FS? Mix Direct for Blood是適合全血模板擴增的濃縮快速高效PCR預(yù)混合溶液,含有FS? Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、緩沖液等PCR擴增必需組分(模板與引物除外)。使用時,僅需在擴增體系中加入模板和引物即可進行PCR,從而可以極大地簡化操作過程,縮短操作時間,降低污染(加樣次數(shù)減少)。FS? Mix Direct for Blood的反應(yīng)體系經(jīng)過優(yōu)化處理,高靈敏度的FS? Taq DNA聚合酶確保處理液中的微量樣本得到高效擴增。本產(chǎn)品不用進行繁瑣的DNA提取,最大限度減少實驗誤差和交叉污染;同時依靠特殊的緩沖體系增強PCR擴增的特異性,保證擴增效果與DNA模板擴增效果同樣可靠。

FS? Taq DNA聚合酶是根據(jù)蛋白工程原理,以Taq DNA聚合酶為基礎(chǔ),研發(fā)設(shè)計的新一代DNA聚合酶。本產(chǎn)品具有類似KOD酶的快速擴增能力,延伸速度為20s/kb70~75℃,簡單模板可達5s/kb)。是普通Taq DNA聚合酶的3倍,可縮短一半以上的擴增時間;同時具備Taq DNA聚合酶擴增效率高、適應(yīng)性廣等優(yōu)點。FS? Taq DNA聚合酶使用方法與普通Taq DNA聚合酶基本相同,只需注意適當(dāng)縮短延伸時間。該酶具有5'→3'聚合酶活性,無3'→5'外切酶活性。擴增產(chǎn)物具有3'-dA突出端,可直接用于TA克隆

產(chǎn)品組成

Component

P2071a

P2072a

2× FS? Mix   Direct for Blood

1 ml

1 ml× 5

超純水

1 ml

1 ml× 5

本產(chǎn)品分體系中包含溴酚藍(lán)、不含溴酚藍(lán)兩類。體系中包含溴酚藍(lán)的產(chǎn)品,PCR擴增產(chǎn)物可直接電泳檢測。這兩類產(chǎn)品的擴增性能無差異。如無特別說明提供體系中包含溴酚藍(lán)的包裝。

保存條件

-20℃保存2年。

質(zhì)量控制

純度檢測:經(jīng)質(zhì)量檢測,產(chǎn)品不含脫氧核糖核酸內(nèi)切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能檢測:PCR方法檢測無宿主殘余DNA,能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。

應(yīng)用舉例

1. 配制反應(yīng)體系

請于冰上配置反應(yīng)體系,體系大小與組分用量與添加順序可調(diào)整:

Ordinal

Component

Volume

(50 μl reaction volume)

Final   concentration

(50 μl reaction volume)

1

2× FS? Mix   Direct for Blood

25   μl

2

upstream   primer (10 μM)[1]

2 μl

0.4   μM

3

downstream   primer (10 μM)[1]

2 μl

0.4   μM

4

全血

0.5   μl

<1μg

5

超純水[2]

To   25 μl

-

optional

MgCl2(MgSO4)/PCR   Enhancer[3]

Variable

-

[1] 引物終濃度建議范圍:0.1-1 μM。特異性差時可降低濃度,效率低時可提高濃度。

[2] 可單獨訂購超純水(Cat. #P9021/P9022/P9023)。

[3] 可單獨訂購25mM MgCl2Cat. #P9031)和PCR EnhancerCat. #P9041)。

2. 設(shè)定反應(yīng)程序進行PCR反應(yīng)

大多數(shù)模板的快速擴增條件:

Stage  

Temperature

Time

Number   of Cycles

Initial   Denaturation

94℃

4   min

1

Denaturation

94℃

30   sec

28-40  

Annealing

55-68℃[1]

30   sec

Extension

72℃

Variable[2]

Final   Extension

72℃

2   min

1

[1] 退火溫度應(yīng)根據(jù)Tm值較低的引物來設(shè)。

[2] 延伸時間按20 sec/kb來設(shè)最佳。

1kb簡單模板的快速擴增條件:

Stage  

Temperature

Time

Number   of Cycles

Initial   Denaturation

95℃

3   min

1

Denaturation

95℃

15   sec

28-40  

Annealing

55-68℃

15   sec

Extension

72℃

20   sec

Final   Extension

72℃

2   min

1

由于1kb簡單模板的二級結(jié)構(gòu)簡單,且長度較短,可同時縮短變性、退火時間至15s,以實現(xiàn)快速擴增。

3. 分析結(jié)果

反應(yīng)產(chǎn)物可直接進行瓊脂糖凝膠電泳,通過凝膠成像設(shè)備觀察目的條帶的擴增情況。如有需要,可進行割膠回收。無產(chǎn)物或產(chǎn)物量少的改進措施有:1調(diào)整退火溫度;2減少抑制劑的影響,如提取的基因組DNA中含有抑制擴增的成分,需要高倍稀釋(1: 10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脫,提高模板DNA的純度;4使用PCR添加劑,如PCR EnhancerCat. #P9041MgCl2Cat. #P9031等可提高產(chǎn)量。

操作注意事項

室溫下FS? Taq DNA聚合酶有一定的活性,為避免發(fā)生非特異性擴增,請于冰上配置反應(yīng)體系,并且最后添加模板DNA

本產(chǎn)品可直接從新鮮或凍存的全血、抗凝全血(EDTA或其他抗凝劑)、FTA卡等樣本擴增DNA。可用于人血或其他動物血液。

延伸時間視片段長度而定。一般情況,≤500bp目的片段延伸15s500bp-1kb延伸20s,>1kb延伸時間按20s/kb計算。

FS? Taq DNA聚合酶具有脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶活性,因此在PCR產(chǎn)物3’末端通常會加上一個多余的脫氧腺嘌呤核苷,可進行TA克隆。

FS? Mix Direct for Blood也可采用常規(guī)程序擴增,擴增產(chǎn)物純化后可直接用于測序反應(yīng)。

為方便加樣,全血可用PBS稀釋后加樣,模板用量根據(jù)樣本、實驗要求而定。

引物設(shè)計注意事項

引物長度一般在15-30個堿基之間;上下游引物3’末端避免互補,避免出現(xiàn)3個以上重復(fù)的GC,或出現(xiàn)發(fā)夾結(jié)構(gòu),否則會產(chǎn)生非特異性擴增;GC含量控制在40-60%,且上下游引物GC含量盡量接近;Tm值控制在55-65℃之間,且上下游引物Tm值盡量接近,額外附加序列(酶切位點、修飾等)是非模板匹配序列,不參與Tm值計算。

相關(guān)產(chǎn)品

名稱

貨號

規(guī)格

PCR Mix

P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

Power Green qPCR Mix

P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

1kb ladder

M1181/M1182

50/250

DSTM5000

M1111/M1112

60/300

高純度質(zhì)粒小提試劑盒

N1011/N1012/N1013

50/100/200

通用RNA提取試劑盒

R1051

50

基因組DNA快速提取試劑盒

N1111/N1112

50/100

DNA凝膠回收試劑盒

N1071/N1072/N1073

50/100/200

RT-PCR Kit

R1011/R1012

20/100

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